產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
BL21(DE3)
詳情介紹：
感受態(tài)細胞基本信息
| 出品公司: | NEB |
|---|---|
| 感受態(tài)細胞名稱: | BL21(DE3) Ultracompetent cells；BL21(DE3) 超級感受態(tài)細胞 |
| 菌種類型: | E.coli |
| 產(chǎn)品規(guī)格: | 10X100 微升 |
| 轉(zhuǎn)化效率: | 大于1X10的9次方 |
| 基因型: |
 |
| 抗性: | 無抗性 |
| 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化條件: | 42 ℃熱激 |
| 生長條件: | 37 ℃, 有氧 |
| 用途: | 非毒性蛋白表達。 |
| 儲存條件: | -70 ℃或者更低溫度保存，避免反復(fù)凍融。 |
感受態(tài)細胞特點和簡介
生物風(fēng)生產(chǎn)的BL21(DE3)感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌BL21(DE3)經(jīng)過特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可以用于質(zhì)粒的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可以高達108 CFU/ug，-70 ℃保存幾個月轉(zhuǎn)化效率也不發(fā)生改變。
大腸桿菌BL21(DE3)生長速度快，表達量高，是原核細胞蛋白表達*基礎(chǔ)的菌株；
蛋白酶Lon和OmpT的缺陷型，能夠有效減少對目的蛋白的降解；
適合IPTG誘導(dǎo)的T7啟動子載體，常用的pET系列載體；
表達非毒性蛋白，有密碼子偏好性。
大腸桿菌BL21(DE3)生長速度快，表達量高，是原核細胞蛋白表達*基礎(chǔ)的菌株；
蛋白酶Lon和OmpT的缺陷型，能夠有效減少對目的蛋白的降解；
適合IPTG誘導(dǎo)的T7啟動子載體，常用的pET系列載體；
表達非毒性蛋白，有密碼子偏好性。
感受態(tài)細胞制備方法
生物風(fēng)在氯化鈣感受態(tài)細胞制作方法的基礎(chǔ)上進行了改良，采用*新的二價錳法感受態(tài)細胞制備方法，制備得到BL21(DE3)超級感受態(tài)細胞（Ultracompetent cell）。轉(zhuǎn)化效率是常規(guī)氯化鈣制備法的10倍。
感受態(tài)細胞操作方法
1. 取BL21(DE3)感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨毎麘乙悍盅b到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
注意：一次轉(zhuǎn)化BL21(DE3)感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。以下實驗以100μl BL21(DE3)感受態(tài)細胞為例。
2. 向BL21(DE3)感受態(tài)細胞懸液中加入目的 DNA (100μl 的感受態(tài)細胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕彈混勻，在冰浴中靜置30 分鐘。
3. 將離心管置于 42 ℃ 水浴中放置60-90秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使BL21(DE3)感受態(tài)細胞冷卻2-3分鐘，該過程不要搖動離心管。
注意：此步驟也可將離心管置于室溫進行，時間不需十分準確，夏季或室溫較高時，可放置5-8分鐘左右；如果室溫較低，可延長時間至8-15分鐘左右。條件允許建議使用 42 ℃ 熱激方法。
4. 向每個離心管中加入900 μl無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37 ℃搖床振蕩培養(yǎng)45 分鐘（150 rpm），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達，使菌體復(fù)蘇。
5. 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100μl已轉(zhuǎn)化的BL21(DE3)感受態(tài)細胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB或者LB 固體瓊脂培養(yǎng)基平板上，用無菌的彎頭玻棒涂布器或玻璃珠將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被完全吸收后，倒置平板，37 ℃培養(yǎng)12-16 小時。
注意：涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化質(zhì)?？偭枯^多，可取更少轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的質(zhì)?？偭枯^少，可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；對于連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化菌液，可以通過離心（4000 rpm，2分鐘）后倒掉大部分培養(yǎng)液上清，吹打懸浮菌體后，將其涂布于一個平板中。
6. 涂布剩余的菌液可置于 4℃冰箱中保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)平板。
感受態(tài)細胞注意事項
1. BL21(DE3)感受態(tài)細胞應(yīng)保存在-70 ℃，不可反復(fù)凍融和放置時間過長，以免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進行轉(zhuǎn)化操作時，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)的溫度及無菌條件的要求進行。
3. 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到*低。
4. 用于轉(zhuǎn)化的連接產(chǎn)物或質(zhì)粒的體積不能超過感受態(tài)細胞體積的15%.
5. 質(zhì)粒超過7.5 kb后，隨尺寸的增加轉(zhuǎn)化效率會下降，質(zhì)粒的尺寸超過10 kb時，在大腸桿菌增殖過程中也可能會出現(xiàn)質(zhì)粒缺失現(xiàn)象；
6. 用于轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒量在0.1 pg~50 ng間的效果*好，超過50 ng質(zhì)粒時，平板上單克隆數(shù)目會增加，但是轉(zhuǎn)化效率會下降。
7. 42 ℃熱擊時間與離心管的厚度、菌液的體積、轉(zhuǎn)入片段的大小直接相關(guān)，一般建議熱擊60-90秒，熱擊時間不宜超過90秒，否則轉(zhuǎn)化效率會下降很快；